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實驗介紹
【技術原理】
酵母單雜交(yeast one hybrid)技術是體外分析DNA與細胞內蛋白質相互作用的一種方法，通過對酵母細胞內報告基因表達狀況的分析，來鑒別DNA結合位點并發(fā)現(xiàn)潛在的結合蛋白基因，或對DNA結合位點進行分析。
其基本原理為：真核生物基因的轉錄起始需轉錄因子參與，轉錄因子通常由一個DNA特異性結合功能域和一個或多個其他調控蛋白相互作用的激活功能域組成，即DNA結合結構域(DNA—bindingdomain，BD)和轉錄激活結構域(activationdomain，AD)?？蓸嫿ǜ鞣N基因與AD的融合表達載體，在酵母中表達為融合蛋白時，根據(jù)報告基因的表達情況，便能篩選出與靶元件有特異結合區(qū)域的蛋白。理論上，在單雜交檢測中，任何靶元件都可被用于篩選一種與之有特異結合區(qū)域的蛋白。
運用此技術，能篩選到與DNA結合的蛋白質，并可直接從基因文庫中得到編碼該蛋白質的核苷酸序列，而無需復雜的蛋白質分離純化操作，故在蛋白研究中，具有一定的優(yōu)勢；而且，酵母屬真核細胞，通過酵母系統(tǒng)得到的結果比其他體外技術獲得的結果更能體現(xiàn)真核細胞內基因表達調控的真實情況。
【實驗流程】
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 動物組織 | 單個樣品>0.1g，2mlEP管或凍存管裝，不要過量；樣本應盡量新鮮，如不能立即提取蛋白或核酸，應液氮速凍后凍存于-80℃或更低，凍存樣本避免反復凍融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 種子樣本 | 去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本，單個樣品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 貼壁/懸浮細胞 | 1. 總RNA或蛋白：106cell/指標、漿/核RNA或蛋白：107cell/指標、線粒體RNA或蛋白：2*107 cell/指標，樣本盡量新鮮，細胞收取后直接加Trizol（QPCR檢測）或直接凍存于-80℃ 2. 若細胞處理（加藥、轉染、感染）后狀態(tài)差應酌情加大收樣量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清樣品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白細胞勻漿>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蠟包埋樣品 | 由標準的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊，有效厚度大于 0.1cm； 新鮮的 FFPE 組織切片，每片厚度不超過 10μm，2~8 張，表面積不超過 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗體 | 1. 按樣本種屬提供滿足相應實驗要求的抗體； 2. 按抗體說明書要求寄送，盡量避免分裝；如分裝，確保量足夠進行實驗，并提供抗體說明書。 3.保存抗體的抗體管上應有能夠識別此抗體的標記，抗體的量應大于實驗所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如進行預實驗，每個基因至少提供兩對引物， 附帶公司引物合成單。 | -20℃ | 冰袋或常溫 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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