細胞焦亡
細胞焦亡是機體一種重要的天然免疫反應(yīng)，在抗擊感染中發(fā)揮重要作用。細胞焦亡廣泛參與感染性疾病、神經(jīng)性疾病和動脈粥樣性疾病等的發(fā)生發(fā)展，并發(fā)揮重要作用。對細胞焦亡的深入研究，有助于認識其在相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中的作用，為臨床防治提供新思路。
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實驗介紹
【應(yīng)用簡介】
細胞焦亡是機體一種重要的天然免疫反應(yīng)，在抗擊感染中發(fā)揮重要作用。細胞焦亡廣泛參與感染性疾病、神經(jīng)性疾病和動脈粥樣性疾病等的發(fā)生發(fā)展，并發(fā)揮重要作用。對細胞焦亡的深入研究，有助于認識其在相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中的作用，為臨床防治提供新思路。
【原理介紹】
細胞焦亡是近年來發(fā)現(xiàn)并證實的一種新的程序性細胞死亡方式，其特征為依賴于半胱天冬酶-1(caspase-1)，并伴有大量促炎癥因子的釋放。細胞焦亡的形態(tài)學(xué)特征、發(fā)生及調(diào)控機制等均不同于凋亡、壞死等其他細胞死亡方式。研究表明，細胞焦亡廣泛參與感染性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病和動脈粥樣硬化性疾病等的發(fā)生發(fā)展，并發(fā)揮重要作用，對細胞焦亡的深入研究有助于認識其在相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中的作用，為臨床防治提供新思路。
細胞焦亡的檢測方法：
1、形態(tài)變化
1.1 掃描電鏡觀察細胞形態(tài)；
1.2 TUNEL染色；
1.3 免疫熒光染色（GSDMD/GSDME）；
2、檢測焦亡相關(guān)蛋白
2.1 q-PCR/Western Blot方法檢測焦亡相關(guān)基因或蛋白的表達水平；
2.2 ELISA試劑盒檢測IL-1β、IL-18等炎癥因子的水平；
2.3 MTT法測定細胞活力。
實驗方法及案例展示
案例一 細胞焦亡與感染性疾病
Yu-Lei Gao,et al,Mediators of Inflammation. 2018
在病原體感染時，適度的細胞焦亡可清除致病微生物，而過度的細胞焦亡在導(dǎo)致細胞死亡的同時，釋放炎癥因子，擴大炎癥反應(yīng)，造成發(fā)熱，低血壓、敗血癥等癥狀。以敗血癥為例，敗血癥是由致病菌侵入血液系統(tǒng)，并在其中生長繁殖，產(chǎn)生毒素，引起全身性感染，最新研究表明，細胞自噬相關(guān)基因Atg7沉默后，可激活細胞焦亡途徑。
案例二 細胞焦亡與代謝性疾病
Beibei Luo,et al,frontiers in psychology.2017.
因代謝障礙或代謝旺盛等原因引起的疾病稱為代謝性疾病，常見的有糖尿病、痛風(fēng)、糖尿病性心肌病等。以糖尿病性心肌病為例，由心肌細胞死亡引起，最新的研究顯示高血糖可以造成活性氧的產(chǎn)生增加，進而上調(diào)NF-κB和TXNIP，NF-κB又可以上調(diào)NLRP3、IL-1β前體以及IL-18前體的表達；TXNIP通過改變NLRP3的結(jié)構(gòu)激活Caspase-1，活化的Caspase-1一方面切割Gasdermin D，形成含有Gasdermin D氮端活性域的肽段，誘導(dǎo)心肌細胞膜穿孔、破裂，釋放內(nèi)容物，引起炎癥反應(yīng)；另一方面，活化的Caspase-1對IL-1β和IL-18的前體進行切割，形成有活性的IL-1β和IL-18，并釋放到胞外，募集炎癥細胞聚集，擴大炎癥反應(yīng)。
案例三 細胞焦亡與神經(jīng)系統(tǒng)疾病
Tan et al. Journal of Neuroinflammation(2015) 12:18
神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括腦損傷，癲癇等。以癲癇為例，研究發(fā)現(xiàn)，癲癇發(fā)作可通過鉀離子外流等途徑激活NLRP1炎癥體，進而激活依賴Caspase-1的焦亡途徑，導(dǎo)致癲癇進一步發(fā)展。
技術(shù)總結(jié)
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細胞 | 1.取對數(shù)生長期的細胞，消化離心收集細胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標明細胞名稱/細胞代數(shù)，凍存細胞數(shù)量在1-5*106個/ml。 2.項目啟動后細胞復(fù)蘇，復(fù)蘇后3天反饋細胞狀態(tài)，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 復(fù)蘇后細胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運輸。細胞匯合度達到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標明細胞名稱/細胞代數(shù)/接種時間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運輸。 2.收到細胞后3天反饋細胞狀態(tài)，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質(zhì)粒 | 1.純度高，無內(nèi)毒素，無蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復(fù)凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復(fù)凍融 3.明確是否表達熒光標簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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