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實驗介紹
【技術(shù)原理】
Masson染色時膠原纖維呈藍色(被苯胺藍所染)或綠色（被亮綠所染），肌纖維呈紅色(被酸性品紅和麗春紅所染)，這與陰離子染料分子的大小和組織的滲透性有關(guān)。如已固定的組織用一系列陰離子水溶性染料先后或混合染色，則可發(fā)現(xiàn)紅細胞被最小分子的陰離子染料著染，肌纖維與胞質(zhì)被中等大小的陰離子染料著染，而膠原纖維則被大分子的陰離子染料著染。由此說明了紅細胞對陰離子染料的滲透性最小，肌纖維與胞質(zhì)次之，而膠原纖維具有最大的滲透性。根據(jù)組織不同的滲透性能，選擇分子大小不同的陰離子染料進行染色，便可把不同組織成分顯示出來。
【實驗流程】
案例展示
肝纖維化
技術(shù)總結(jié)
【常見問題】
1、染色易脫片
組織本身破碎或過硬等，用防脫載玻片解決；
脫水、透明不足，重新脫水透明浸蠟；
脫水、透明過度，用酒精甘油各半浸泡切面后再切片。
切片過厚，厚薄均勻切片。
2、切片染色不均
取材固定不當，取材規(guī)范標準，固定徹底；
脫水不夠，重新脫水、透明、浸蠟。
3、切片染色模糊不清
包埋蠟溫度過高；
分化過度；
脫水透明不徹底。
【注意事項】
1、蘇木素用于細胞核的染色，為便于組織結(jié)構(gòu)的觀察，染色時間可根據(jù)結(jié)果自行調(diào)整；
2、Masson復合染色液，經(jīng)磷鉬酸分化時須用顯微鏡控制，見肌纖維呈紅色，膠原纖維程淡紅色即可；
3、組織用Bouin氏液固定為佳。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鮮組織 | 新鮮取材組織，用 PBS 清洗干凈血液等，立即-80℃保存 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 一般固定組織 | 一般組織體積不超過2cmX2cmX0.5cm，固定時盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分，如腸道內(nèi)容物；固定液體積為組織大小的10倍以上，容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標注好固定液類型和固定時長 | 常溫 | 常溫 | |
| 特殊固定組織 | 睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織：推薦使用對應的特殊固定液進行固定，以保證固定效果。如Bouin液，適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定 | |||
| 組織蠟塊 | 組織由標準的石蠟包埋盒包埋（尺寸為30*24*7mm），石蠟與組織要均勻接合，不能有裂痕；蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定，有效厚度至少要超過 0.1cm。盡量提供半年內(nèi)的組織蠟塊，超過半年的蠟塊抗原可能丟失，做免疫組化可能出現(xiàn)檢測不到蛋白。 | 常溫 | 常溫 | |
| 組織切片 | 需用防脫載玻片進行撈片，并注明切片厚度、已烤片溫度與時間，組織應在靠近切片下端 1/3 處。 | 4℃ | 冰袋 | |
| 細胞爬片 | 使用 12 孔板或 24 孔板專用細胞爬片，細胞爬片經(jīng)固定后用 PBS 洗滌 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每個爬片在孔板蓋上應有唯一的標記，并有電子版的分組信息，以防標記在運輸途中模糊。 | 常溫 | 常溫 | |
| 植物樣本 | 新鮮組織FAA固定，木質(zhì)化程度不高；對于較薄的葉片，如果要求平行葉片切片，難以保證切完整；根莖要求直徑>1mm | 常溫 | 常溫 | |
| 抗體 | 保存抗體的抗體管上應有能夠識別此抗體的標記，并附帶說明書，抗體的量應大于實驗所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計算抗體用量， 24 孔板細胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl 一張計算抗體用量，12 孔板細胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計算抗體用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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