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湖南省長沙市
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2025-12-31 23:51:12
浙江省麗水市
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2025-12-31 19:57:31
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實驗介紹
【技術原理】
隨著分子生物學研究尤其是人類基因組計劃的迅速發(fā)展，為適應對眾多基因或蛋白進行功能研究的發(fā)展趨勢，已出現了很多新技術。其中酵母雙雜交技術以其簡便，靈敏，高效以及能反映不同蛋白質之間在活細胞內的相互作用等特點在基因功能的研究中得到廣泛的應用。
酵母雙雜交系統(tǒng)的建立基于對真核生物調控轉錄起始過程的認識。酵母轉錄因子GAL4含兩個結構域：DNA結合功能域和轉錄激活結構域，前者可識別DNA上的特異序列，并使轉錄激活結構域定位于所調節(jié)基因的上游，后者同轉錄復合體的其他成分作用，啟動相應基因的轉錄。將編碼DNA結合功能域的基因與已知誘餌蛋白質基因構建在同一個表達載體上，在酵母中表達兩者的融合蛋白，將編碼DNA轉錄激活域的基因和cDNA文庫的基因構建在AD-LIBRARY表達載體上，同時將上述兩種載體轉化改造后的酵母。當兩種載體所表達的融合蛋白能夠相互作用時，功能重建的反式作用因子能夠激活酵母基因組中的報告基因，從而通過功能互補和顯色反應篩選到陽性菌落。將陽性反應的酵母菌株中的AD-LIBRARY載體提取分離出來，從而對載體中插入的文庫基因進行測序和分析工作。
酵母雙雜交實驗原理圖
【實驗流程】
案例展示
酵母雙雜交系統(tǒng)（two-hybrid system）案例一
酵母雙雜交系統(tǒng)（two-hybrid system）案例二
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 動物組織 | 單個樣品>0.1g，2mlEP管或凍存管裝，不要過量；樣本應盡量新鮮，如不能立即提取蛋白或核酸，應液氮速凍后凍存于-80℃或更低，凍存樣本避免反復凍融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 種子樣本 | 去殼新鮮或保存于液氮中的的種子樣本，單個樣品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 貼壁/懸浮細胞 | 1. 總RNA或蛋白：106cell/指標、漿/核RNA或蛋白：107cell/指標、線粒體RNA或蛋白：2*107 cell/指標，樣本盡量新鮮，細胞收取后直接加Trizol（QPCR檢測）或直接凍存于-80℃ 2. 若細胞處理（加藥、轉染、感染）后狀態(tài)差應酌情加大收樣量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清樣品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白細胞勻漿>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蠟包埋樣品 | 由標準的石蠟包埋盒包埋的石蠟塊，有效厚度大于 0.1cm； 新鮮的 FFPE 組織切片，每片厚度不超過 10μm，2~8 張，表面積不超過 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗體 | 1. 按樣本種屬提供滿足相應實驗要求的抗體； 2. 按抗體說明書要求寄送，盡量避免分裝；如分裝，確保量足夠進行實驗，并提供抗體說明書。 3.保存抗體的抗體管上應有能夠識別此抗體的標記，抗體的量應大于實驗所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如進行預實驗，每個基因至少提供兩對引物， 附帶公司引物合成單。 | -20℃ | 冰袋或常溫 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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