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實驗介紹
【應用簡介】
血管生長是腫瘤發(fā)生的關鍵步驟。無論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤，一旦生長直徑超過1~2 mm，都會有血管生成，這是由于腫瘤細胞自身可分泌多種生長因子，誘導血管生成。多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長迅速，因此，血管生成在腫瘤的發(fā)展轉移過程中起到重要作用，抑制這一過程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴散轉移。體外的血管生成實驗能很好的模擬腫瘤的血管發(fā)生過程，并且適合研究藥物對這一過程的影響。
【技術原理】
應用Matrigel模擬機體環(huán)境，上面接種腫瘤細胞，觀察血管生成情況。
【實驗方法】
Step1：細胞培養(yǎng)
Step2：細胞轉染或藥物處理
Step3：鋪Matrigel膠
Step4：接種細胞
Step5：觀察血管生成情況
案例展示
與對照組相比，處理因素能夠明顯抑制血管生成。
技術總結
1、實驗前一天需要將Matrigel置于冰盒，放入冰箱中，同時需要準備一些預冷的槍頭用于吸取Matrigel膠；
2、將Matrigel膠加到血管生成載玻片時注意槍頭要垂直于內孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流經(jīng)上孔而留下殘留膠；
3、需要按照細胞的生長速度定時采集圖像，并且對其成管長度、覆蓋面積、成環(huán)數(shù)和結點進行測量和記錄，并且對其進行統(tǒng)計分析；
4、分上下孔的ibidi血管生成載玻片能去除凹液面，使成像效果更好。
送檢與交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 凍存細胞 | 1.取對數(shù)生長期的細胞，消化離心收集細胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標明細胞名稱/細胞代數(shù)，凍存細胞數(shù)量在1-5*106個/ml。 2.項目啟動后細胞復蘇，復蘇后3天反饋細胞狀態(tài)，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 復蘇后細胞 | 1.使用T25培養(yǎng)瓶運輸。細胞匯合度達到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標明細胞名稱/細胞代數(shù)/接種時間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運輸。 2.收到細胞后3天反饋細胞狀態(tài)，3-5天反饋細胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細胞詳細信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息） | 常溫 | 常溫 | |
| 質粒 | 1.純度高，無內毒素，無蛋白質，基因組DNA/RNA污染，質粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無內毒素處理 3. 載體詳細信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標記 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復凍融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，體積約200μl，標明制備時間，且沒有反復凍融 3.明確是否表達熒光標簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜； | -80℃ | 干冰 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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